Perché si usa?
TBX Agar è un terreno di coltura solido selettivo differenziale e cromogenico per la ricerca e quantificazione di Escherichia coli Ꞵ-glucuronidasi positiva nei prodotti destinati al consumo umano e nei prodotti per l’alimentazione animale.
Composizione del terreno
TBX Agar (g/L)
- Triptone (digerito enzimatico di caseina): 20
- Sali biliari n° 3: 1,5
- Agar: 14
- 5-bromo-4-cloro-3-indolil Ꞵ-D glucuronide (X-GLUC): 0,075
L’uso del dimetil sulfossido indicato nella norma UNI ISO 16649-2:2010 non si rende necessario, poiché il composto X-GLUC è incluso nel terreno.
pH finale 7,2 ± 0,2
Come funziona?
Escherichia coli assorbe il substrato cromogeno (X-Ꞵ-D-glucuronide) e l’enzima batterico Ꞵ-D-glucuronidasi divide il legame tra la frazione X cromoforica e il Ꞵ-D-glucuronide. La frazione X libera permette la crescita delle colonie sul terreno con una colorazione blu-verde tipica.
L’elevato contenuto di Sali biliari nel terreno di coltura TBX Agar inibisce la crescita dei batteri Gram positivi, mentre invece l’elevata temperatura di incubazione delle piastre (44 °C) inibisce i batteri Gram negativi diversi da Escherichia coli.
Il batterio Escherichia coli è una delle poche specie Ꞵ-glucuronidasi positiva all’interno della famiglia delle Enterobacteriaceae, insieme a qualche ceppo del genere Salmonella e Shigella, e quindi coltiva sul terreno di coltura con colonie blu.
Gli Enterobatteri Ꞵ-glucuronidasi negativi, invece, producono colonie incolori sul TBX Agar.
Preparazione del terreno
- Sospendere 35,6 grammi del terreno in 1000 millilitri di acqua distillata fredda;
- Portare ad ebollizione sotto agitazione fino a completa dissoluzione;
- Autoclavare a 121°C per 15 minuti;
- Raffreddare a 44 – 47°C e, infine, distribuire il terreno di coltura TBX Agar in piastre Petri sterili.
Risultati della crescita
I ceppi di microrganismi, indicati in tabella 1, sono associati ai codici specifici di ATCC® e / o NCTC che rappresentano le principali collezioni di microrganismi esistenti. Dopo l’incubazione delle piastre contenenti il terreno di coltura TBX Agar a 44±1°C per 18 – 24 ore, viene effettuato il controllo dei risultati della crescita batterica.
| Microrganismi | Metodo di controllo | Crescita – caratteristiche tipiche |
| Escherichia coli ATCC 25922 | Quantitativo | Buona ( ≥ 50%) – Colonie blu-verdi |
| Escherichia coli ATCC 8739 | Quantitativo | Buona ( ≥ 50%) – Colonie blu-verdi |
| Escherichia coli NCTC 13216 | Quantitativo | Buona ( ≥ 50%) – Colonie blu-verdi |
| Enterococcus faecalis ATCC 19433 | Qualitativo | Totale inibizione – Nessuna crescita |
| Enterococcus faecalis ATCC 29212 | Qualitativo | Totale inibizione – Nessuna crescita |
| Citrobacter freundii ATCC 43864 | Qualitativo | Buona – Colonie non colorate |
| Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 | Qualitativo | Buona – Colonie non colorate |
Immagini
Fonti
- Biolife Italiana S.r.l.
- Merckmillipore
- Scharlab S.L.
- Liofilchem S.r.l.
- UNI ISO 16649-2:2010: Microbiologia di alimenti e mangimi per animali – Metodo orizzontale per la conta di Escherichia coli beta glucuronidasi positiva, parte 2: Tecnica della conta delle colonie a 44°C che utilizza 5-bromo-4-cloro-3-indolil beta-D-glucuronide
