R2A Agar

Perchè si usa?

L’R2A agar è un terreno agarizzato con proprietà nutritive ridotte (concentrazione bassa di peptoni) e viene utilizzato principalmente per la crescita di batteri eterotrofi nelle acque potabili trattate. Il terreno è raccomandato dalla farmacopea europea (european pharmacopoeia) per la conta microbica totale attraverso l’utilizzo delle membrane filtranti. L’utilizzo del terreno in oggetto si basa sul principio per il quale molti microorganismi batterici vivono in ambienti idrici con limitate quantità di sostanze nutritive ed a temperature vicine a quella ambiente e, pertanto, si coltivano meglio su terreni colturali con basse concentrazioni di peptoni a temperatura ambiente.

Composizione del terreno

Estratto di lievito	0.50 g/L
roteose Peptone	0.50 g/L
Idrolizzato acido di caseina	0.50 g/L
Glucosio	0.50 g/L
Amido solubile	0.50 g/L
Di potassio fosfato	0.30 g/L
Sodio piruvato	0.30 g/L
Agar	14.0 g/L
Magnesio solfato anidro	24.0 mg
pH finale	7.2 ± 0.2 a 25 ºC

Preparazione del terreno

preparazione in polvere

Sospendere 17,12 g di polvere in 1000 ml di acqua distillata fredda;
Portare ad ebollizione fino a completa soluzione;
Autoclavare a 121°C per 15 minuti (non surriscaldare).

Preparazione in flacone

In un bagnomaria termoregolato a 100°C introdurre i flaconi e riscaldare fino ad ebollizione;
Attendere che il terreno arrivi a dissoluzione completa;
Raffreddare a 45-50°C e versare in piastre sterili.

Risultati della crescita

Microrganismo	Ceppo certificato ATCC	Crescita
Pseudomonas aeruginosa	ATCC® 9027	Buona
Bacillus subtilis	ATCC® 6633	Buona
Enterococcus faecalis	ATCC® 19433	Buona
Escherichia coli	ATCC® 8739	Buona
Staphylococcus aureus	ATCC® 6538	Buona
Candida albicans	ATCC® 10231	Buona
Aspergillus brasiliensis	ATCC® 16404	Buona

Immagini

Figura 1 – Piastre di R2A agar a confronto su microorganismi isolati da fonti diverse. Questa immagine esemplifica le differenze morfologiche che si possono manifestare con specie batteriche differenti.

Figura 2 – Piastra di R2A agar in cui si evidenziano morfologie microbiche differenti di batteri isolati dal terreno.

Figura 3 – Crescita di specie microbiche e fungine differenti sul terreno R2A agar.

Procedura del test

Preparare diluizioni seriali del campione di acqua per ottenere un adeguato numero di colonie finali per il conteggio ed allestire due set di piastre per ciascuna diluizione;
Inoculare il terreno per inclusione, spatolamento o con il metodo delle membrane filtranti;
Incubare in atmosfera aerobica un set di piastre a 30-35°C per un tempo compreso tra 3-5 giorni e l’altro set a 20-25°C per un tempo compreso tra 5-7 giorni;
Al termine del periodo di incubazione delle piastre, riportare la conta come CFU/ml di campione tenendo conto del fattore di diluizione ed annotando tempo e temperatura di incubazione.