Phenol Red Carbohydrate Broth

Perché si usa?

Il Phenol Red Carbohydrate Broth è comunemente usato nel test di fermentazione dei carboidrati per differenziare i microrganismi in base al loro metabolismo fermentativo (vedi Carbohydrate Fermentation test). Il rosso fenolo è un indicatore di pH che viene utilizzato e diventa giallo al di sotto di un pH di 6,8 e fucsia sopra un pH di 7,4. Se l’organismo è in grado di utilizzare il carboidrato presente nel terreno di coltura, viene creato un sottoprodotto acido che fa virare il terreno in colore giallo. Se l’organismo non è in grado di utilizzare il carboidrato ma usa il peptone, il sottoprodotto è l’ammoniaca, che aumenta il pH del mezzo e lo fa virare in colore fucsia. Quando l’organismo è in grado di utilizzare il carboidrato, può essere prodotto gas sottoforma di bolla che verrà intrappolata all’interno della campanella di Durham. Se l’organismo non è in grado di utilizzare il carboidrato, il gas non verrà prodotto e non si formerà alcuna bolla d’aria.

Composizione del terreno

• Trypticase o peptone 10 g;
• Cloruro di sodio (NaCl) 5 g;
• Estratto di manzo (facoltativo) 1 g;
• Rosso fenolo (7,2 ml di soluzione di rosso fenolo allo 0,25%) 0,018 g;
• Fonte di carboidrati: 10 g.

pH finale richiesto*: 7.4 ±0.2 a 25°C

Preparazione del terreno

• Preparare il brodo mescolando tutti gli ingredienti in 1000 ml di acqua distillata/deionizzata e riscaldare delicatamente per dissolverlo (utilizzare una singola fonte di carboidrati in base alle proprie esigenze);
• Riempire le provette da 13 x 100 mm con 4-5 ml di brodo;
• Inserire una campanella di Durham per rilevare la produzione di gas;
• Sterilizzare in autoclave i supporti del test preparati a 121 °C per 15 minuti (quando si utilizzano arabinosio, lattosio, maltosio, salicina, saccarosio, trealosio o xilosio, sterilizzare in autoclave a 121 °C per soli 3 minuti poiché questi carboidrati sono soggetti a degradazione in autoclave).

Quality control

Nella tabella seguente viene evidenziata nella prima colonna il microrganismo ATCC di riferimento, nella seconda colonna il tempo di incubazione, nella terza colonna la temperatura di incubazione, nella quarta colonna l’atmosfera e nell’ultima colonna la tipologia di crescita.

Immagini

Figura 4 – Terreno non inoculato di Phenol Red Broth con Destrosio

Figura 5 – i possibili risultati del terreno con rosso fenolo includono: (A) formazione di acido e gas (la bolla è indicata dalla freccia), (B) formazione di acido senza gas, (C) controllo non inoculato, (D) formazione di alcuni sottoprodotti alcalini e (E) assenza di acido o gas formazione.

Fonti

• http://www.microbiologiaitalia.it/2019/05/25/carbohydrate-fermentation-test/
• https://www.austincc.edu/microbugz/phenol_red_broth.php
• https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/Content/hugo/PhenolRedCarbTestMed.htm